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申克孢子细菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)图片
产品货号:
BTN15-90000
中文名称:
申克孢子细菌荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称:
Sporothrix schenckii qPCR Kit(Probe Method)
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本产品是根据探针法qPCR原理开发检测申克孢子细菌的产品。


  1. 即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
  2. 根据申克孢子细菌设计引物和探针,能专一性地检测出申克孢子细菌,但不能检测其他非申克孢子细菌。
  3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
  4. 一管式闭管操作,降低了交叉污染。
  5. 本产品只能用于科研。
  6. 本产品足够50次20μL体系的荧光定量PCR。



组分规格
2×Probe qPCR Magic Mix1mL
荧光PCR专用模板稀释液1mL
申克孢子细菌探针法qPCR引物混合液100μL
申克孢子细菌qPCR探针50μL
申克孢子细菌探针法qPCR阳性对照(1×108拷贝/uL)50μL

保存:-20℃,有效期一年。



一、稀释标准曲线样品(以102~107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)
  1. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
  2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。
  3. 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
  4. 换枪头,在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
  5. 换枪头,在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
  6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。


二、样品DNA的制备
  1. 用自选方法纯化样品的DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
  2. 如果有N个样品,则需要进行N+2个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。


三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
  1. 如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
  2. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复):
    成分样品管
    N+2个
    PCR阴性
    对照管
    曲线样品管
    (2~7管)
    2×Probe qPCR MagicMix10μL10μL各10μL
    申克孢子细菌探针法qPCR探针1μL1μL各1μL
    申克孢子细菌探针法qPCR
    引物混合液
    2μL2μL各2μL
    N+2个待测DNA模板7μL不加不加
    超纯水不加7μL不加
    第7步所得标准曲线样品稀释液(2~7号)不加不加各7μL


    四、qPCR反应参数
  3. 盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR:
    过程温度时间
    预变性95℃5min
    PCR反应
    (40个循环)
    95℃15sec
    60℃1min(采集FAM通道的荧光信号)


五、数据处理
  1. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值,再推算出其浓度。
  2. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于35。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于35则为阴性,如果小于或等于30则为阳性。如果在30~35之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于35则为阴性,如果小于35,则为阳性。




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